Utilisation de sang placentaire pour la production d’un CAR CD123 dans la leucémie à cellules dendritiques plasmacytoïdes

XVIIIes Journées du GPCO

Blandine Caël, Élodie Bôle-Richard, Jeanne Galaine, Francine Garnache-Ottou EFS-BFC, Inserm 1098, Besançon, France


INTRODUCTION

Le pronostic péjoratif quelle que soit la thérapie utilisée de la leucémie à cellules dendritiques plasmacytoïdes (LpDC) a conduit au développement de biothérapies ciblant le CD123 (surexprimé dans 100 % des blastes de LpDC) et de LT génétiquement modifiés par un CAR (Chimeric Antigen Receptor). Leur persistance est un élément clé de leur efficacité à long terme. Elle dépend de différents paramètres comme la source des LT utilisés ou leur phénotype mémoire en lien les conditions de culture in vitro1. Notre équipe a précédemment développé un CAR123 de troisième génération à partir de LT de sujet sain adulte (SA) en présence d’IL-2. En utilisant les propriétés du sang placentaire (SP), nous avons cherché à obtenir des CAR123 efficaces et persistants in vivo 2.

MÉTHODE

À partir de SP (banque de SP de l’EFS-B/FC), nous avons généré des CAR123. Le rendement de transduction et le profil de différenciation des LT (grâce aux marqueurs CD45RA, CD45RO, CCR7, CD95) a été évalué en comparaison avec des CAR de SA cultivés en présence d’IL-7/IL-15. Après co-culture avec les cellules cibles CAL-1 CD123+, la fonctionnalité des CAR123 (cytotoxicité et sécrétion de cytokines : l’IFN-τ et IL-2) a été évalué. La persistance in vivo a été étudiée dans les modèles murins NSG.

RÉSULTATS

Les LT du SP sont capables de se transduire de façon similaire aux LT du SA (52,5 % ± 19,6 % n=8 versus 73,5 % ± 14,9 % n=7, p=0,06). Le taux de LT naïfs du SP est élevé (92,8 % ± 5,9 % TCD4 et 90,7 % ± 5,9 % TCD8 vs 29,8 % ± 12,8 % TCD4 et 29,6 % ± 18,8 % TCD8 de SA), et maintiennent un phénotype peu différencié neuf jours après expansion avec une majorité de TSCM-TCM (68,1 % ± 12,9 TCD4 et 49,2±16,9 TCD8, n=8). Les LT du SA sont plus différenciés (31,8 ± 16,5 % TCD4 et 32,8 ± 16,5 % TCD8, n=7). Indépendamment de leur source, les CAR123 activent des fonctions cytotoxiques en présence des cellules cibles conduisant à la sécrétion d’IFN-τ, d’IL-2 et menant à la lyse des CAL-1 (94,3 % ± 3,8 % pour les CAR123 de SP, n=8 versus 93,8 % ± 3,9 % pour les CAR123 de SA; n=7, ns)

In vivo, les CAR123 du SP sont efficaces et permettent un contrôle de la leucémie (survie : 160 jours

pour les souris traitées par CAR123 versus44 jours pour les souris traitées par C0; p=0,0062 36 versus 58 jours/27 jours avec le SA dans le même modèle). Le phénotype peu différencié des CAR avant injection, entraîne une persistance de ceux-ci in vivo (28,5 % de CD4 TSCM et TCM 83 jours post injection du CAR-T).

DISCUSSION

Ce travail a permis de générer des CAR123 à partir de SP présentant un phénotype peu différencié et conservant des fonctions cytotoxiques in vitro et in vivo ainsi qu’une persistance importante in vivo.
Le SP est une source intéressante pour la production de CAR autologue (post greffe de SP) ou de CAR allogéniques à partir des SP disponibles en grande quantité dans les banques de SP actuel- lement sous-exploités
3.


Références

  1. Rafiq S., Hackett, C. S. & Brentjens R. J. Engineering strategies to overcome
    the current roadblocks in CAR T cell therapy. Nat. Rev. Clin. Oncol. 17, 147–167 (2020).

  2. Bôle-Richard E. et al. CD28/4-1BB CD123 CAR T cells in blastic
    plasmacytoid dendritic cell neoplasm. Leukemia (2020) doi:10.1038/s41375-020-0777-1.

  3. Politikos I. et al. Guidelines for Cord Blood Unit Selection. Biol. Blood Marrow Transplant. J. Am. Soc. Blood Marrow Transplant. 26, 2190–2196 (2020).,