Cross-validation d’une méthode LC-MS/MS multiplexée de quantification des anticorps monoclonaux chez les patients atteints de cancer : une étude GPCO-Unicancer

XVIIIes Journées du GPCO

Clémence Marin1, Nihel Khoudour2, Aurélien Millet3, Dorothér Lebert4, Pauline Bros4, Fabienne Thomas5, David Ternant6, Bruno Lacarelle7, Jérôme Guitton8, Joseph Ciccolini1

  1. Laboratoire de Pharmacocinétique et Toxicologie - COMPO - SMARTc, APHM-AMU, Marseille, France

  2. Département de Pharmacocinétique et Pharmacochimie, APHP, Paris, France

  3. Laboratoire de Biochimie et Pharmaco-toxicologie, HCL, Lyon, France

  4. Promise Proteomics, Promise Proteomics, Grenoble, France

  5. Institut Claude Regaud - CRCT, IUCT-Oncopole - Université Paul Sabatier, Toulouse, France

  6. Département de Pharmacologie clinique, CHRU Tours - Université de Tours, Tours, France

  7. Laboratoire de Pharmacocinétique et Toxicologie, APHM, Marseille, France

  8. Laboratoire de Biochimie et Pharmaco-toxicologie - Département de Toxicologie, HCL,

    Faculté de Pharmacie Lyon 1, Lyon, France

  9. Laboratoire de Pharmacocinétique et Toxicologie - COMPO - SMARTc, APHM - AMU, Marseille, France

INTRODUCTION

Le Suivi Thérapeutique Pharmacologique (STP) des anticorps monoclonaux (mAbs) pourrait être un outil utile pour évaluer leur variabilité pharmacocinétique chez les patients atteints de cancer, et ainsi adapter la posologie ou le schéma d’administration en conséquence. Outre les techniques ELISA, différentes méthodes de LC-MS/MS ont été publiées pour quantifier les mAbs dans le plasma, mais jusqu’à présent, aucun ne permettait la quantification simultanée de plusieurs mAbs, y compris les immune checkpoint inhibitors.

MÉTHODE

Nous avons développé et validé une méthode originale de LC-MS/MS multiplex utilisant un kit prêt à l’emploi(mAbXmise®) pour doser simultanément jusqu’à 7 mAbs (c’est-à-dire bévacizumab, cétuxi- mab, nivolumab, ipilimumab, pembrolizumab, rituximab, et trastuzumab) dans le plasma. Les perfor- mances de cette méthode ont ensuite été comparées aux méthodes de références publiées (ELISA ou LS-MS/MS standard) pour tous les mAbs, à l’exception de l’ipilimumab. Le kit mAbXmise® a été utilisé pour l’extraction des mAbs avec des anticorps entier marqués à l’isotope stable comme étalon interne. La méthode multiplex a été entièrement validée conformément aux directives actuelles de l’EMA.

RÉSULTATS

La méthode est linéaire de 2 à 100 μg/mL pour tous les mAbs. La fidélité inter- et intra-essai était
< 14,6% et la justesse de 90,1-111,1%. Aucun effet matrice n’a été observé. 

Chaque cross-validation entre les méthodes de références et la nôtre comprenait 16 à 28 échan- tillons de plasma provenant de patients atteints de cancer traités par des mAbs. Le biais absolu moyen des concentrations mesurées entre la méthode multiplex et les méthodes de références était de 10,6 % (intervalle de 3,0 à 19,9 %).

DISCUSSION

Cette méthode multiplexe LC-MS/MS permet la détermination rapide de 7 mAbs en moins de 15 minutes par run. Elle remplit tous les critères en termes de justesse, de fidélité et de spécificité, ainsi que de rapidité et de simplicité de mise en œuvre dans le cadre d’un STP de routine en onco- logie clinique. Cette méthode pourrait également être utilisée pour étudier les relations PK/PD des mAbs. Enfin, elle est la première à offrir une quantification simultanée de trois immun checkpoint inhibitors (c’est-à-dire les anti-PD1, nivolumab, pembrolizumab et les anti-CTLA4, ipilimumab) qui sont susceptibles d’être associés chez certains patients atteints de cancer.

Mots clefs : LC-MS/MS, biomédicaments, suivi thérapeutique pharmacologique, cross-validation, immunothérapies.